培养皿规格尺寸的计算，在国际上有两种不同的计算方法：一种方法是按皿盖计算，理由是在培养时使用恒温箱内进行培养，它可以计算恒温箱的体积可存放多少个培养皿；另一种计算方法是按照培养皿皿底计算，理由是在培养时可按照培养皿的皿底体积计算使用多少培养基。

      使用前经过清洁消毒，培养皿清洁与否对工作影响较大，可影响培养基的酸碱度，若有某些化学药品的存在，会抑制细菌的生长。新购的培养皿应先用热水冲洗，再置于质量分数为 1 %或 2 %的盐酸溶液中浸泡数小时，使游离碱性物质除去，再用蒸馏冲洗 2 次。若要培养细菌，再用高压蒸气  (一 般 6. 8 × 105Pa 高压蒸气)，120℃ 的温下30min灭菌，置室温中干燥，或用干热灭菌，就是将培养皿置于烘箱内，温度控制在 120℃左右的情况下维持 2h，即可杀死细菌的胞芽。经过消毒的培养皿才能接种培养使用。

      培养皿通常使用固体培养基制成平板培养 (就是平板皿名称的由来)，平板培养基制作是将已装好的灭菌琼脂培养基，用温水 (无菌)溶化，取下试管的棉花塞，管口子酒精灯火焰上通过，然后微启灭菌的培养皿盖，使试管口能深入为宜，倾入培养基后即可盖密，再轻轻地摇匀倾入的培养基，使之均匀地分布于皿底上凝结，即得平板培养基。由于细菌的繁殖、发育生长是与所供给的培养基 (营养)有直接关系，尤其是作定量检验分析，对提供营养物的多少，有决定意义。

      细菌培养时对营养物提供的多少、是否均匀，培养皿皿底是否平整极为重要，如培养皿皿底不平，琼脂的培养基分布将随培养皿皿底是否平整而有厚有薄，薄的部分营养供给就不足，这对定量分析有着密切关系，故对定量培养皿皿底要求特别平整的原因所在。但作一般定性 (检验细菌、菌落生长、繁殖等)，使用普通培养皿即可。